Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程里逐渐扩展

从第一次出有现肝细胞自身免疫到出有现1DF肝炎病理疼痛的成效叛将在孩童时期就有不太好的描绘，多个肝细胞自身免疫非典型的孩童当则有70%在血清转换后10周内中风肝炎，而随访15年的孩童这一数目增大到84%。远比之下，占到病理1DF肝炎一半以上的DF1DF肝炎的胃癌机制还未获得充分的研究者。

越来越多的人开始可用分期系统来判别1DF肝炎的成效：母锥体在出有现多种肝细胞自身免疫时转入第1阶段，出有现血糖异常时转入第2阶段，出有现疼痛时转入第3阶段。一些多发肝细胞自身免疫非典型的母锥体，在1期和2期，成效较迟，并其发展为胃癌的1DF肝炎。我们之前描绘了一两组在首次探测到多种肝细胞自身免疫检验后至少10年无肝炎的极迟成效者，这两组病变人数少，但特征比较明确。随后，我们找到肝细胞自身上皮细胞专一性CD8+T蛋白质反应在成效缓迟的病变当中基本不存在，但在早先胃癌和长期存在的肝炎病变当中很容易探测到。这也许声称，与成效病变远比，这些病变自身抗体的调控增强。

后期研究者声称，尽管调控性T蛋白质(Treg)量长时间，但肝炎病变存在一些功能性有缺陷，其当中包含对IL-2的反应潜能下降。此外，肝炎病变当中的震荡CD4+T蛋白质也许对调控凸显抵抗性，表现为震荡T蛋白质的诱导西移动，连续性消除的Treg和锥体内消除的诱发Treg，以及上皮细胞漫长的CD4+T蛋白质当中IL-2反应西移动。本研究者的目的是描绘了CD4+调控性T蛋白质(Treg)在一小群极缓迟成效者当中的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以许多人为基础的纵向研究者，在21岁都有确诊的病变亲属当中检查1DF肝炎的危险因素。我们之前描绘了长期缓迟成效者的特征，他们保持一致多重肝细胞自身免疫非典型超过10年，但未出有现肝炎的病理疼痛，迟性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名独自保持一致无肝炎并主动提供大量肝脏检验的缓迟成效者纳入T和B蛋白质功能性量化。在目前的研究者当中，8名迟成效者(SP两组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身免疫非典型。所有的与会者都处于1DF肝炎成效的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身免疫对某些上皮细胞的非典型反应，然而，一名病变已经处于2期至少6年，但未出有现病理疼痛，一名病变被诊断为肝炎，该受试者72岁，在采集试验检验时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据量化当中对该ADP顺利完成了除此以外核查。分开外周血单个核蛋白质(PBMCs)，采用多参数流式蛋白质法术和T蛋白质诱导试验核查ADP当中Treg的频叛将、表DF和功能性。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、也就是说和复归)顺利完成无监督聚类量化，核查Treg表DF。

结果：与肥胖ADP远比，来自迟成效锥体的思绪CD4+T蛋白质的监督聚类推测，诱导的思绪CD4+ Treg频叛将增大，与糖皮质激素诱发的TNFR涉及蛋白(GITR)传达增大有关。一名HbA1c增大的病变与成效缓迟者和意味着的相符合两组远比，Treg谱有所不同。功能性量化声称，与肥胖ADP远比，来自缓迟成效锥体的Treg诱导的CD4+震荡T蛋白质诱导明显破损。表现为对震荡CD4+T蛋白质CD25和CD134传达的诱导增大。

所示1 透彻的表DF量化推测，CD4+Treg亚DF在迟成效函数调用当中增大。由FlowSOM生成的Treg楼内，聚集在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标示物传达鉴定出有10个元簇:思绪T蛋白质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T蛋白质;HLA-DR + GITR +思绪T蛋白质;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)可用9个不同Treg标示生成的10个元簇的MST。每个数据流代表者一个战略性(100个战略性)，很大的元战略性(10个元战略性)在数据流两组周边上色。每个数据流当中的饼所示坚称单个标示的传达分级。(b)每个元聚类的热所示，以推测整锥体标示传达。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成所示，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比较同位素为每个metacluster装入终点站所示(同位素> 0.05%)确定为HD和SP两组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T蛋白质(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T蛋白质(l)。黄色圆点代表者慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩核查。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 可用CITRUS的预测模DF声称，Treg频叛将的增大是成效缓迟的标志。分级依赖型(a - f)和龙眼量化(g-k)比较SP与会者和意味着的HD与会者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的代表者性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR传达顺利完成分开，模拟FlowSOM社会性。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及ADPSP 606(黄色)当中CD25+ cd127的频叛将汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型空集的装入终点站所示;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)龙眼簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，箭头突出有的簇被标识为SP和HD函数调用之间的不同。(j)装入终点站所示推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组当中，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相比较同位素(数目)。(k)直方所示推测每个簇的表DF(粉红色)和Treg标示相比较传达与背景传达(黄色);上列，闪存Treg_3;上头一路上，闪存Treg_4。背景与所有其他簇当中标示的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩核查

所示3 与肥胖献血者远比，成效缓迟者思绪treg的GITR增大。每个思绪CD4+T蛋白质元簇(思绪T蛋白质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T蛋白质;HLA-DR + GITR +思绪T蛋白质;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个传达标示的发生变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的传达热所示(sp606不包含在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR传达串联，推测直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon配对记号秩和核查，p< 0.07(黄色)所有ADP包含，p< 0.05(黄色)ADPSP 606和意味着的HD不包含在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR传达，从分级依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)串联，推测直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩核查

所示4 来自缓迟成效的CD4+ treg蛋白质控制震荡CD4+T蛋白质的潜能下降。SP两组用黄色的终点站和圆点坚称，HD两组用白色的终点站和圆点坚称，黄色的终点站/圆点坚称ADPsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利完成分选。CD4+CD25−(；也者)被标示为CFSE, Treg按捕捉到的数目滴定。用抗CD3 /28微珠再造蛋白质，培育出3在此之后顺利完成流式蛋白质法术探测。(a-d)与CD4+；也者相比较应的treg培育出(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培育出。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE诱导百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导百分比。可用非典型相符合(诱导的响应蛋白质内含treg)计算诱导百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 震荡CD4+T蛋白质对缓迟成效的T蛋白质再造的诱导更敏感。SP两组用黄色的终点站和圆点坚称，HD两组用白色的终点站和圆点坚称，黄色的终点站/圆点坚称ADPsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利完成分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标示，treg按捕捉到的数目滴定。用抗CD3 /28微珠再造蛋白质，培育出3在此之后顺利完成流式蛋白质法术(CD25反染)和蛋白质因子量化。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培育出。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE诱导百分叛将(b)。(c,d) CD25诱导百分叛将(c)和CD134诱导百分叛将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出当中的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们得出有的事实是，来自缓迟成效子的再造思绪CD4+Treg在GITR传达当中获得了扩展到和充沛，重申了进一步研究者Treg在1DF肝炎风险母锥体当中的性状的必要性。

原文出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28